Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1 cd 5

Immunobloty uzyskane 24 godziny po transfekcji wykazały podobne wyniki (ryc. S3 w dodatkowym dodatku). GAPDH oznacza dehydrogenazę gliceraldehydo-3-fosforanową. W komórkach HEK293T transfekowanych zmutowanym CTNNB1 stwierdzono zwiększoną aktywność transkrypcyjną konstruktu lucyferazy reagującego na TCF / LEF, w porównaniu z kontrolą wektora i dzikiego typu CTNNB1 (Figura 2A). Analiza Western wykazała zwiększoną ekspresję aktywnej .-kateniny (niefosforylowanej przy resztach Ser33, Ser37 i Thr41) przez trzy zmutowane linie komórkowe (Figura 2B). Ponadto większa część całkowitej .-kateniny była w aktywnej formie (ryc. S3 w dodatku uzupełniającym). Continue reading „Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1 cd 5”

Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1 cd..

Te gruczolaki kontrolne wybrano ze względu na ich wcześniejsze włączenie do półilościowej analizy histologicznej typu komórki.10,12 Analiza funkcjonalna mutacji CTNNB1
Po wytworzeniu mutantów p-kateniny (Ser33Cys, Gly34Arg i Ser45Phe) za pomocą mutagenezy ukierunkowanej, zmierzono aktywność Wnt-.-kateniny za pomocą testów reporterowych lucyferazy TCF / LEF. Stabilizację mutantów wykazano za pomocą metody Western blotting, przy użyciu przeciwciała monoklonalnego, które wykrywa transkrypcyjnie aktywną postać .-kateniny (patrz sekcja Metody w dodatkowym dodatku).
Ex Vivo Badania nad powstawaniem gruczolaków produkujących aldosteron
Test mikromacierzy przeprowadzono na 42 próbkach RNA (14 triach próbek z gruczolaków, sąsiadującej zona fasciculata i przyległej zona glomerulosa, w tym próbkach od Pacjenta 1). Patrz rozdział Metody w Dodatku Dodatkowym) .12 Ekspresja genu w gruczole Pacjent 3 był wcześniej badany za pomocą mikromacierzy.10
Mierzono poziomy mRNA genu LHCGR, GNRHR i gonadalnego czynnika transkrypcyjnego GATA4 (mRNA) w gruczolakach i sąsiadującej tkance nadnerczy od wszystkich trzech pacjentów, stosując ilościowy test reakcji łańcuchowej polimerazy (qPCR) z określonymi starterami. Analizę immunohistochemiczną przeprowadzono na utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie skrawkach nadnerczy (4 .m grubości) dla .-kateniny (BD Biosciences) i LHCGR (Sigma). Aby potwierdzić bezpośredni wpływ mutacji CTNNB1 na ekspresję receptorów hormonu luteinizującego i ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej, barwienie immunofluorescencyjne przeprowadzono na komórkach gruczolakowatych podobnych do zona glomerulosa po transfekcji CTNNB1 typu dzikiego lub zmutowanego (patrz sekcja Metody w dodatkowym dodatku ).
Wyniki
Identyfikacja mutacji w Exon 3 CTNNB1
Sekwencjonowanie całego genomu gruczolaka wytwarzającego aldosteron od Pacjenta wykazało heterozygotyczną mutację somatyczną (C . Continue reading „Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1 cd..”

Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1..

Początkowe podejrzenie zespołu Gitelmana zostało wykluczone po partum, kiedy kolejny test jej poziomu reniny ponownie wykazał supresję (<2 mU na litr). Poziom aldosteronu w osoczu utrzymywał się na poziomie 1268 pmol na litr (45,7 ng na decylitr), pomimo prawie normalizacji stężenia potasu w osoczu w wyniku suplementacji potasu. Rezonans magnetyczny ujawnił guzek 17-milimetrowy w jej lewym nadnerczu (ryc. 1A); gruczoł został usunięty, a wyniki badań histologicznych i immunohistochemicznych gruczolaka (ryc. 1B i ryc. S1 w dodatkowym dodatku) były podobne do tych u Pacjenta 1. Pacjentka 3, 52-letnia kobieta, została skierowana w 2008 r. Continue reading „Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1..”

Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1.

Wydaje się zatem prawdopodobne, że wysokie poziomy ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej, hormonu luteinizującego lub hormonu uwalniającego gonadotropinę (obserwowane w ciąży lub w okresie menopauzy) doprowadziły do identyfikacji gruczolaków wytwarzających aldosteron u trzech pacjentów. Opisy przypadków
Tabela 1. Tabela 1. Pomiary biochemiczne i cechy fenotypowe nowotworów. Rysunek 1. Rycina 1. Obrazowanie nadnerczy i cechy histologiczne u trzech pacjentów z gruczolakami produkującymi aldosteron. Continue reading „Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1.”