Ciąża, pierwotny Aldosteronizm i Mutacje Adrenal CTNNB1 cd 5

Immunobloty uzyskane 24 godziny po transfekcji wykazały podobne wyniki (ryc. S3 w dodatkowym dodatku). GAPDH oznacza dehydrogenazę gliceraldehydo-3-fosforanową. W komórkach HEK293T transfekowanych zmutowanym CTNNB1 stwierdzono zwiększoną aktywność transkrypcyjną konstruktu lucyferazy reagującego na TCF / LEF, w porównaniu z kontrolą wektora i dzikiego typu CTNNB1 (Figura 2A). Analiza Western wykazała zwiększoną ekspresję aktywnej .-kateniny (niefosforylowanej przy resztach Ser33, Ser37 i Thr41) przez trzy zmutowane linie komórkowe (Figura 2B). Ponadto większa część całkowitej .-kateniny była w aktywnej formie (ryc. S3 w dodatku uzupełniającym).
Wzmocnienie receptorów gonad w zmutowanych gruczolakach
Rycina 3. Rycina 3. Badania ex vivo nad rodzicielstwem aldosteronu. Pankel A pokazuje wyniki analizy mikromacierzy ekspresji LHCGR i GNRHR w gruczolaku wytwarzającym aldosteron (APA) u Pacjenta 1, w porównaniu z sześcioma zona glomerulosa (ZG ) Podobne do kontrolnych gruczolaków i siedmiu kontrolnych gruczolaków kontrolnych typu Zona Fasciculata (ZF). T bary oznaczają błędy standardowe. Panel B pokazuje wyniki ilościowego testu reakcji łańcuchowej polimerazy (qPCR), który potwierdza, że ekspresja obu genów jest znacznie wyższa w APA trzech pacjentów niż w sześciu podobnych do ZG i APF typu kontrolnego podobnych do ZF. Zmiana czynnika log2 odnosi się do różnicy między guzem a sąsiadującą nietransorową tkanką nadnerczy w ekspresji LHCGR i GNRHR. Panel C pokazuje barwienie immunohistochemiczne dla .-kateniny i hormonu luteinizująco-kosmówkowego gonadotropiny (LHCGR) na komórkach gruczolaka po adrenalektomii u trzech pacjentów, w porównaniu z sąsiadującą tkanką nadnerczy. (Dla każdego pacjenta komórki gruczolaka są pokazane po lewej stronie, a przylegająca tkanka nadnercza jest pokazana po prawej stronie.) Paskowe słupki oznaczają 50 .m. Panel D pokazuje barwienie immunofluorescencyjne dla białek LHCGR w komórkach gruczolaka podobnych do ZG transfekowanych zmutowanym (Ser33Cys) CTNNB1. Kolor czerwony wskazuje na zmutowaną .-kateninę LHCGR, zieloną GFP (białko zielono-fluorescencyjne) i niebieski jądrowy DNA barwiony 4 , 6-diamidino-2-fenyloindolem (DAPI).
Analiza metodą mikromacierzy wykazała, że LHCGR jest najbardziej nadeksprymowanym genem (× 748), a następnie GNRHR (x 120), w gruczolaku wytwarzającym aldosteron od Pacjenta 1, w porównaniu z 13 innymi gruczołami (7 zona fasciculata i 6 zona glomerulosa). jak gruczolaki bez mutacji CTNNB1) (Figura 3A). Te wzrosty LHCGR i GNRHR zostały potwierdzone za pomocą testu qPCR we wszystkich trzech gruczolakach z mutacjami CTNNB1 (Figura 3B).
Analiza immunohistochemiczna wykazała większą ekspresję .-kateniny i bardziej obfite barwienie błony LHCGR w zmutowanych gruczolakach niż w sąsiadującej tkance nadnerczy (Figura 3C). Transfekcja pierwotnych komórek gruczolaka podobnego do kłębuszków z mutantem CTNNB1 doprowadziła do ekspresji LHCGR, co wykazano przez barwienie immunofluorescencyjne, podczas gdy nietransfekowane komórki na tym samym szkiełku nie barwiły LHCGR (Figura 3D) (dla wyników w kontrolach, patrz Fig. S4). i S5 w dodatkowym dodatku).
Dyskusja
Istnieją doniesienia o mutacjach CTNNB1 w nowotworach nadnerczy7 oraz o nieprawidłowych receptorach sprzężonych z białkiem G (w tym LHCGR i GNRHR) w gruczolakach produkujących aldosteron, 13-16, jak również o opisach przypadków gruczolaka podobnego do zrogowcówki w pacjent podczas ciąży.17 Nasze odkrycia wiążą te obserwacje i dostarczają podstawy molekularnej dla dalszej obserwacji, że ciąża może zdemaskować gruczolaka wytwarzającego aldosteron typu zona glomerulosa.
[hasła pokrewne: psycholog warszawa, dzianina dresówka, Kabiny Sanitarne ]

Powiązane tematy z artykułem: dzianina dresówka Kabiny Sanitarne psycholog warszawa